【試驗(yàn)道理】

流式細(xì)胞儀(FCM)是八十歲月集單克隆抗原、熒光化學(xué)、激光、計劃機(jī)等高本領(lǐng)興盛起來的一種進(jìn)步儀器，已普遍運(yùn)用于免疫性學(xué)、生去世學(xué)、底棲生物學(xué)、腫瘤學(xué)以及血液學(xué)等上面的接洽和臨床慣例處事。個中檢驗(yàn)和測定人白細(xì)胞外表標(biāo)記可獨(dú)白血病、淋巴液瘤效率趕快精確的確診，對淋巴液細(xì)胞群和亞群舉行透徹分門別類，還能辨別純化某一群或亞群細(xì)胞。活細(xì)胞免疫性熒光本領(lǐng)是用來FCM檢驗(yàn)和測定的標(biāo)本籌備，染色后也能在熒光顯微鏡下舉行查看，在某些試驗(yàn)前提下，活細(xì)胞免疫性熒光染色后的奇異性和敏銳性要優(yōu)于滴片恒定的慣例轉(zhuǎn)彎抹角免疫性熒光的截止。

活細(xì)胞外表保持有較完備的抗原或受體，先用奇異性鼠源性單克隆抗原與細(xì)胞外表相映抗原貫串，再用熒光標(biāo)志的第二抗原貫串，按照所測定的熒光強(qiáng)度和陰性百分率即可知相映抗原的密度和散布。

【本領(lǐng)與操縱】

（1）制備活性高的細(xì)胞懸液(培植細(xì)胞系、外周血單個核細(xì)胞、胸腺細(xì)胞、脾細(xì)胞等均可用來本法)。

（2）用10％FCS　RPMI1640安排細(xì)胞濃淡為5×10６～１×10７／ml。

（3）取40μl細(xì)胞懸液介入預(yù)先有奇異性McAb(5～50μl)的小玻璃管或塑料離心管，再加50μl 1∶20(用DPBS稀釋)滅活平常兔血小板，4℃ 30min。

用清洗液清洗2次，歷次加清洗液2ml安排，1000rpm×5min。

（4）棄上清，介入50μl處事濃淡的羊抗鼠(或兔抗鼠)熒光標(biāo)志物，充溢振搖，4℃ 30min。用清洗液清洗2次，歷次加液2ml安排，1000rpm×5min。

（5）加過量恒定液(如為FCM制備標(biāo)本，普遍介入1ml恒定液，如制片后在熒光顯微鏡下查看，視細(xì)胞濃淡介入100～500μl恒定液)。

（6）FCM檢驗(yàn)和測定或制片后熒光顯微鏡下查看(標(biāo)本在滴定管中可生存5～7天)。

【提防事變】

（1）所有操縱在4℃下舉行，清洗液中加有比慣例防腐劑量高10倍的NaN３，上述試驗(yàn)前提是提防一抗貫串細(xì)胞膜抗原后爆發(fā)交聯(lián)、零落。

（2）清洗要充溢，以制止游離抗原封鎖二抗與細(xì)胞膜上一抗相貫串，展示假陰性。

（3）加過量平常兔血小板可封鎖某些細(xì)胞外表免疫性球卵白Fc受體，貶低和提防非奇異性染色。

（4）細(xì)胞活性要好，要不易爆發(fā)非奇異性熒光染色。

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